流式细胞仪标本的制备流式细胞仪（FCM）是八十年代集单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高技术发展起来的一种先进仪器，已广泛应用于免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学以及血液学等方面的研究和临床常规工作。其中检测人白细胞表面标志可对白血病、淋巴瘤作用迅速正确的诊断，对淋巴细胞群和亚群进行分类，还能分离纯化某一群或亚群细胞。活细胞免疫荧光技术是用于FCM检测的标本准备，染色后也能在荧光显微镜下进行观察，在某些实验条件下，活细胞免疫荧光染色后的特异性和敏感性要优于滴片固定的常规间接免...

ELISA是酶联接免疫吸附剂测定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay）的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。（一）原理ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除...

标本的收集与保存临床检验常见的标本一般包括血液（指血，静脉血），尿，粪便，脑脊液，胸腹水，前列腺液，精液，阴道分泌物等，这些标本收集的时间、方法和保存都有一定的要求。一、血液标本有些生理因素，如吸烟、进食、运动、情绪波动、妊娠、体位等均可影响血液中某些成分的变化，有些甚至还有昼夜变化。因此血液标本的采集应尽量避免生理因素干扰，以条件一致为宜，如无法避免，应在标本上注明该因素。1．外周血一般选取左手无名指内侧采血，该部位应无冻疮，炎症，水肿，破损。如该部位不符合要求，以其他手指...

1、免疫检测的基础知识ELISA是一种免疫测定。免疫测定（immunoassay，IA）是应用免疫学技术测定标本的方法。在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。1.1抗原抗原是能在机体中引起特异性免疫应答的物质。抗原进入机体后，可刺激机体产生抗体和引起细胞免疫。在免疫测定中，抗原是指能与抗体结合的物质。能在机体中引起抗体产生的抗原多为分子量大于5000的蛋白质。小分子化合物在与大分子蛋白质结合后能引起机体产生特异性抗体的，称为半抗原（hapten）。例如...

WesternBlot工作原理蛋白质的电泳分离是重要的生物化学分离纯化技术之一,电泳是指带电粒子在电场作用下,向着与其电荷相反的电极移动的现象.根据所采用的支持物不同,有琼脂糖凝胶电泳,淀粉凝胶电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳等.其中,聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）由于无电渗作用,样品用量少（1-100μg）,分辨率高,可检出10-9-10-12mol的样品,凝胶机械强度大,重复性好以及可以通过调节单体浓度或单体与交联剂的比例而得到孔径不同的凝胶等优点而受到广泛的应用.SDS-PAG...

荧光探针Fluo-3/AM和FuraRed测量单细胞中比率钙中国医学物理学杂志1999年第3期第16卷实验研究作者：马晓冬朱晓亮赵清张瑾张飒雷国华黄行许鲍永耀单位：马晓冬赵清张瑾张飒雷国华黄行许鲍永耀（*军医大学中心实验室）；朱晓亮（南方医院皮肤科,广东广州510515）关键词：激光扫描共聚焦显微镜；Fluo-3/AM；FuraRed；比率钙...摘要：应用ACAS570激光扫描共聚焦显微镜（laserscanningconfocalmicroscope，LSCM简称共焦显微...

激光扫描共焦显微镜（LSCM）是八十年代问世的一种新型分析仪器，由于其高分辨率，高灵敏度，高放大率等特点，在细胞水平上能作多种功能测量和分析，成为分析细胞学的重要研究工具，激光扫描共焦显微镜是在显微镜基础上配置激光光源，扫描装置，共轭聚焦装置和检测系统而形成的新型显微镜。它对活细胞分层扫描后得到光学切片，可进行细胞三维重建。测量分析细胞形态学参数和荧光强度。利用荧光探针标记LSCM可以对细胞内微细结构和离子的动态变化进行定性、定量、定时和定位分析。LSCM可以进行显微手术，细...

摘要：目的建立流式细胞仪测定血小板胞浆游离钙离子浓度\[Ca2+\]i的方法。方法用Fluo3AM作为钙指示剂，在有或无细胞外钙\[Ca2+\]o存在的条件下，测定静息和凝血酶激活状态下人血小板胞浆游离钙离子浓度\[Ca2+\]i的变化。结果Fluo3AM标记的血小板的平均荧光强度明显增加。凝血酶使负载Fluo3AM标记的血小板胞浆\[Ca2+\]i明显增加，且显示剂量依赖和对\[Ca2+\]o的依赖。结论凝血酶引起血小板胞浆\[Ca2+\]i增加的来源主要是\[Ca2...

培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，MEM做粘附细胞培养"细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养"细胞培养是一个好的开始，各种目的无血清培养AIMV（12005）培养基（SFM）。L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一...

（一）直接免疫荧光标记法取一定量细胞（约1X106细胞／ml），在每一管中分别加入50μl的HAB，并充分混匀，于室温中静置1分钟以上（）,再直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应（如做双标或多标染色，可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入），。孵育20-60分钟后，用PBS（pH7．2—7．4）洗1-2次，加入缓冲液重悬，上机检测。本方法操作简便，结果准确，易于分析，适用于同一细胞群多参数同时测定。虽然直标抗体试剂成本较高，但减少了间接标记法中较强的非特异荧光的干扰，因...

ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。操作步骤可能原因解决办法选择试剂选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。加样1.血清或血浆标本分离不好即进行加样；2.手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长（特别是...

的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。ELISA的操作因固相载体的形成不同而有所差异，国内医学检验一般均用板式点。本文将叙述板式ELISA各个操作步骤的注意要点，珠式、管式及磁性球ELSIA，国外试剂均与特殊仪器配合应用，两者均有详细的使用说明，严格遵照规定操作，必能得出准确的结果。4.1标本的采取和保存可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标...