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石蜡切片免疫组化染色步骤
1、载玻片的处理:抗原修复过程中,由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响,极易造成脱片。为保证试验的正常进行,可选用我公司提供的ZLI-9001APES、ZLI-9003HistogripTM或ZLI-9005Poly-L-Lysine等几种试剂,对已清洗的载玻片进行处理。具体方法如下:1.1APES:现用现配。将洗净的玻片放入以1:50比例丙酮稀释的APES中,停留20~30秒钟,取出稍停片刻,再入纯丙酮溶液或蒸馏水中涮去未结合的APES,置通风橱中晾干即可。用此载玻片捞片时...
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血小板计数法(直接试管法)
1原理用一种能破坏血液中的红细胞,但能保护血小板形态完整的稀释液稀释血液,滴入血细胞计数池,在高倍镜下直接计数血小板数。2器材和试剂器材同白细胞计数法。稀释液用许汝和氏尿素稀释液。许汝和氏尿素稀释液配制法:尿素10g,福尔马林0.1ml,枸橼酸钠0.5g,加水至100ml,溶解后过虑,在冰箱内保存。3操作步骤a.用2ml吸管准确吸取血小板稀释液0.38ml置小试管中。b.从耳垂采血,用0.02ml吸管准确吸取*滴血,吹入稀释液中,并吹吸两次洗净吸管壁内的血。c.充分振摇,滴入...
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白细胞计数法(试管法)
1原理用稀乙酸将血液稀释20倍,使红细胞全部溶解,滴入白细胞计数池中,在显微镜下计数,求得每立方毫米血液中的白细胞数。2器材和试剂2.1器材生物显微镜、Neubauer氏血细胞计数池、0.02ml吸管、小试管、刺血针、2ml吸管。2.2试剂白细胞稀释液:采用3%乙酸溶液。3稀释液的配制采用3%乙酸溶液。即取冰乙酸3ml,加蒸馏水至100ml混合。亦可于上述稀释液中加美蓝或龙胆紫液1~2滴,便于观察。稀释液应经常过滤,以除去尘埃、异物或微生物的影响。4方法4.1取血于小试管中加...
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影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法
ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用,但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大,如不注意,有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给同行带来一些启发,提高试验质量。操作步骤可能原因解决办法选择试剂选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。加样1.血清或血浆标本分离不好即进行加样;2.手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是...
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实验采血要点
材料与试剂1.抗凝剂(1)肝素:肝素是含硫酸基的粘多糖,常用其钠盐或钾盐,它能阻止凝血酶原转化为凝血酶,进而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白,从而阻止血液凝固。常用的肝素溶液浓度为1000U/ml,市售肝素多为100U~126U/mg。(2)乙二胺四乙酸(EDTA):是一种螯合剂。用生理盐水配制成4%的溶液备用。(3)阿氏液(Alsever液),配方如下:枸橼酸钠(Na3C6H5O7·5H2O)0.80g枸橼酸0.0325g葡萄糖2.05g氯化钠0.42gH2O加至100.00ml...
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血细胞分离原理
在体外进行细胞免疫检测时,首先必须进行淋巴细胞的分离。分离淋巴细胞的方法很多,但不管采用哪种方法,均要求分离的淋巴细胞纯度高、产量多,而且不丧失活性,同时也要求分离技术简单、操作方便。外周血液中红细胞和白细胞的比例在几百甚至上千比一,两类细胞的大小和密度不同,其沉降速度也就不同。红细胞的自然沉降率较快,加入高分子量的聚合物,如明胶、右旋糖酐等还可以加速其凝聚。利用自然沉降法、密度梯度离心法或二者结合,可以将淋巴细胞从血液中分离出来。这种分离出的淋巴细胞一般包括单核细胞。除去单...
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ELI-SPOT 及其应用
一、原理ELI-SPOT,即斑点ELISA,是利用酶标板作反应容器进行的酶联免疫反应。其基本原理与ELISA相同。首先用捕获抗体包被反应板,封闭后,依次加入待检标本、生物素化检测抗体、链霉菌抗生物素蛋白-碱性磷酸酶及底物,阳性结果出现斑点显色,利用倒置显微镜进行斑点计数。其优势在于可在与体内(活体条件)极接近的条件下,在体外对细胞分泌成分(如细胞因子、Fas等)进行追踪研究。几点说明:l反应板:ELI-SPOT所用的反应板可以是PVDF膜包被好的,也可以是普通酶标板。如用普通...
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细胞内钙离子PH值和其它离子的动态分析
细胞内钙离子PH值和其它离子的动态分析通过Indo-1、Fluo-2、Fluo-3、Calciumgreen、SNARF等多种荧光探针,可对细胞内钙离子、钠离子及PH值等作荧光标记并对它们进行比率值和浓度梯度变化测定。由于细胞内钙离子为传递信息的第二信使,对细胞生长分化起着重要作用,通过单标记或双标记对细胞内钙离子和其它离子的荧光强度和分布测定,测定样品达到毫秒级的快速变化。借助光学切片功能可以测量样品深层的荧光分布以及细胞光学切片的生物化学特性的变化。通过不同时间段的检测可...
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重组人的载脂蛋白E2 ApoE2
Synonyms:ApolipoproteinE2Description:ApoEbelongstoagroupofproteinsthatbindreversiblywithlipoproteinandplayanimportantroleinlipidmetabolism.Inadditiontofacilitatingsolublizationoflipids,theseproteinshelptomaintainthestructuralintegrityoflipo...
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脂联素和肥胖的关系
脂联素的概念Adiponectin(脂联素)是脂肪细胞分泌的一种内源性生物活性多肽或蛋白质.人体内的Adiponectin(脂联素)由244个氨基酸组成,分子量为30KD.Adiponectin(脂联素作为一种胰岛素增敏激素(AnInsulin-sensitizingHormone),可以增加促进骨骼肌细胞的脂肪酸氧化和糖吸收,明显加强胰岛素的糖元异生作用,抑制肝脏的糖生成,是机体的脂质代谢和血糖稳态的调控网络中的重要调节因子.日本学者近来证明Adiponectin(脂联素)...
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人肿瘤坏死因子(TNFα elisa kit)酶联免疫法定量检测试剂盒
人肿瘤坏死因子酶联免疫法定量检测试剂盒HumanTNF-aELISAKit产品描述:肿瘤坏死因子(TNF)是一种具有广泛生物学活性的细胞因子,主要由激活的单核-巨噬细胞所分泌,参与机体的免疫调节与炎症反应,也是某些感染性疾病和肝脏损伤的致病因素。正常人体液中的TNF水平一般在100pg/ml以下,当患有某些疾病时,TNF水平可有不同程度增高。因此,检测患者体液中的TNF水平,具有一定的临床意义。本试剂盒采用双抗夹心酶联免疫检测法测定人血浆或血清中的TNF,包被抗体及检测抗体采...
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血浆脂联素和肿瘤坏死因子-α在2 型糖尿病中
血浆脂联素和肿瘤坏死因子-α在2型糖尿病中的作用及相关性柳江燕,陈雪红,胡金贵,王正江,马冬梅,鲁秀娟柳江燕730030兰州大学第二医院核医学科;陈雪红730030兰州大学第二医院核医学科;胡金贵730030兰州大学第二医院核医学科;王正江730030兰州大学第二医院核医学科;马冬梅730030兰州大学第二医院核医学科;鲁秀娟730030兰州大学第二医院核医学科通讯作者:柳江燕730030兰州大学第二医院核医学科【摘要】目的探讨血浆脂联素(adiponectin)和肿瘤坏死因...
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